常見問題與解答
一般來說，相同序列和修飾、相同數量的多肽會因為其純度的不同而價格各異，純度越高，單位質量的多肽價格也越高。肽谷生物可以提供粗品、脫鹽，70%到99%不同純度級別的多肽供客戶按需選擇使用。 各種多肽純度及應用范圍如下：
大規模功能性篩選
粗品多肽
肽微陣列
作為制備抗體的抗原
層析法
酶聯免疫吸附試驗檢測抗血清滴度
>70%和>75%的多肽
免疫印跡法（非定量）
酶底物肽（非定量）
封閉肽（非定量
親和純化
磷酸化檢測
蛋白電泳的應用和免疫細胞化學
>80%，>85%和>90%的多肽
標準酶聯免疫吸附試驗和RIA（定量）
受體配體相互作用（定量）
體內、體外 生物學測定
酶的研究和阻斷實驗（定量）
NMR研究
質譜分析
其他定量檢測
>95%的多肽
SAR研究
臨床試驗
APIs(藥物活性成分)
工業品
X-ray晶體研究
其他敏感的實驗：酶與底物、受體與配體相互作
用、阻斷和競爭實驗
>98%的多肽
所有的凍干多肽產品可以在常溫下避光運輸，并可以在室溫條件下保存幾天或者少于一個星期，多肽性狀是穩定的。所有的凍干多肽產品，都必須保存在干燥低溫的條件下，以-20℃的低溫為佳，若有條件最好保存在-80℃以下，在這樣的條件下大多數多肽可存放1-2年。
當需要使用多肽產品時，應在開蓋之前將多肽產品升至室溫；對保存于-20℃的產品，該過程需要1h或更長，因包裝大小而異。否則，當打開瓶蓋時，水氣進入會導致多肽凝縮而降低其穩定性。一旦打開，應迅速稱量完畢，并立即密閉以免潮解，親水肽尤其應注意。
對序列中含有Cys、Met、Try的易氧化多肽和含有Gln、Asn、Asp的易降解多肽，應避免反復融凍，以免多肽被氧化和降解，因此建議分裝成小包裝保存。需要多少解凍多少，用后棄去，不要保存。
對于暫時不用的多肽，不要以溶液的形式保存（即使在-80°C的條件下）。
多肽的溶解性很大程度上取決于多肽的極性。酸性的蛋白溶解于堿性溶液， 而堿性蛋白可溶解于酸性溶液，含有大量不帶電荷的極性氨基酸殘基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可先溶解于少量有機溶劑中，如DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或異丙醇，然后加蒸餾水稀釋。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不能用DMSO溶解，因為DMSO可能造成側鏈氧化。
多肽溶解測試： 在多肽溶解之前先取小部分進行多肽溶解測試，您需要測試幾種不同的溶劑，直到找到最適當的一種。超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。（注意: 超聲處理會引起溶液發熱和多肽降解。）
1，
將每個酸性氨基酸賦值為-1，包括天冬氨酸（D）、谷氨酸（E）、以及羧基末端-COOH。 每個堿性氨基酸賦值為+1，包括精氨酸（R）、賴氨酸（K）、組氨酸（H）以及氨基末端-NH2。然后計算整個多肽的電荷數。2，
如果整段肽所帶電荷是陽性的，說明該肽是堿性的。可先嘗試用蒸餾水來溶解；如果不溶于水，接著嘗試用少量10%-25%醋酸溶解，如果仍然失敗的話，添加一些TFA（10-50微升）來增溶，然后用水稀釋至理想濃度。3，
如果整段肽所帶電荷是陰性的，說明該肽是酸性的。酸性的多肽可以嘗試用PBS（PH 7.4）來溶解， 如果不溶的話，添加少量的堿性溶劑，如0.1 M的碳酸氫銨，然后加水稀釋至理想濃度。含有游離半胱氨酸的多肽應溶于脫氣的酸性緩沖液中，因為當PH值大于7時，巰基會被迅速氧化成二硫化物。4，
如果整段肽電荷是零，說明肽是中性的。中性肽通常溶于有機溶劑。首先，嘗試添加少量乙腈、甲醇或異丙醇。對于高度疏水的多肽，可使用少量的二甲基亞砜溶解，然后用水稀釋至理想濃度。對于含有自由半胱氨酸的肽，需使用DMF而不是DMSO。對于有聚集傾向的肽，可添加6M鹽酸胍或8M尿素，然后進行必要的稀釋。為了防止或盡量減少多肽降解，請將多肽以凍干粉形式保存在-20°C，-80°C更佳。如果需要保存溶液肽，最好分成小樣存放，以避免反復凍融。一份樣品融凍后未用完，應扔掉。細菌降解有時會成為溶液肽的麻煩，所以請將肽溶于無菌水或肽溶液過濾除菌。
如何選擇合適的熒光標記基團取決于您的實驗需求。藥理學實驗研究基本分為體內研究和體外研究兩大類。
對于體內研究，一般選擇發射波長在650-900nm的熒光基團，例如：ICG、Cy5.5和 Nile Blue。這是因為這類基團所發出的熒光具有較好的組織穿透能力，受背景干擾較小(水、血紅蛋白和脫氧血紅蛋白一般都會產生背景干擾吸收，其區域在560nm左右)。
對于體外研究，發射波長在400到600nm的熒光基團最為常用，例如：AMC、FITC和TAMRA。
熒光標記的多肽在現代醫學中的應用是很廣泛的。例如：用Cy5.5標記的目標多肽研究對 c-Met受體的綁定作用。有人設計含有KSLSRHDHIHHH序列的cMBP，其C端為GGGSC， C端Cys用 Cy5.5-Maleimide標記其巰基側鏈。研究結果表明：上述Cy5.5-cMBP多肽與U87MG腫瘤細胞共孵24小時后，具有較高的癌細胞攝取值，其響應濃度在納摩爾級別。
脫酰胺反應：在脫酰反應中，Asn/Gln 殘基水解形成Asp/Glu。非酶催化的脫酰胺反應的進行。 在Asn-Gly-結構中的酰胺基團更易水解，位于分子表面的酰胺基團也比分子內部的酰胺基團易水解。
氧化多肽溶液易氧化的主要原因有兩種，一是溶液中有過氧化物的污染，二是多肽的自發氧化。在所有的氨基酸殘基中，Met、Cys和His、Trp、Tyr等最易氧化。氧分壓、溫度和緩沖溶液對氧化也都有影響。
水解：多肽中的肽鍵易水解斷裂。由Asp參與形成的肽鍵比其它肽鍵更易斷裂，尤其是Asp-Pro和Asp-Gly 肽鍵。
形成錯誤的二硫鍵：二硫鍵之間或二硫鍵與巰基之間發生交換可形成錯誤的二硫鍵，導致三級結構改變和活性喪失。
消旋：除Gly外，所有氨基酸殘基的α碳原子都是手性的，易在堿催化下發生消旋反應。其中Asp殘基最易發生消旋反應。
β-消除：β-消除是指氨基酸殘基中β碳原子上基團的消除。Cys、Ser、Thr、Phe、Tyr等殘基都可通過β-消除降解。在堿性PH下易發生β-消除，溫度和金屬離子對其也有影響。
變性、吸附、聚集或沉淀變性一般都與三級結構以及二級結構的破壞有關。在變性狀態，多肽往往更易發生化學反應，活性難以恢復。在多肽變性過程中，首先形成中間體。通常中間體的溶解度低，易于聚集，形成聚集體，進而形成肉眼可見的沉淀。
定點突變: 通過基因工程手段替換引起多肽不穩定的殘基或引入能增加多肽穩定性的殘基， 可提高多肽的穩定性。
化學修飾: 多肽的化學修飾方法很多，研究最多的是PEG修飾。PEG是一種水溶性高分子化合 物，在體內可降解，無毒。PEG與多肽結合后能改善多肽的溶解性，可以進行生物相容性調節，提高熱穩定性，抵抗蛋白酶的降解，降低抗原性，延長體內半衰期。 選擇合適的修飾方法和控制修飾程度可體質或提高原生物活性。
添加劑: 通過加入添加劑，如糖類、多元醇、明膠、氨基酸和某些鹽類，可以提高多肽的穩定性。糖和多元醇在低濃度下迫使更多的水分子圍繞在蛋白質周圍，因而提高了多肽的穩定性。在凍干過程中，上述物質還可以取代水而與多肽形成氫鍵來穩定多肽的天然構象 ，而且還可以提高凍干制品的玻璃化溫度。此外表面活性劑如SDS、Tween、Pluronic能防止多肽表面吸附、聚集和沉淀。
凍干: 多肽發生的一系列化學反應如脫酰胺、β-消除、水解等都需要水參與，水還可以作為其它反應劑的流動相。另外，水含量降低可使多肽的變性溫度升高。因此，凍干可提高多肽的穩定性。
Copyright ?2020 南京肽谷生物科技有限公司 備案號：蘇ICP備19062824號-1 網站地圖
